Preparasi sel mamalia CHO-DG44 dan isolasi plasmid dari bakteri Eschericia coli DH5-alfa sebagai tahap dalam produksi protein terapeutik erythropoetin sebagai obat anemia
Abstract
Erythropoietin (Miranda dkk.) merupakan suatu hormon yang menstimulasi sumsum tulang untuk memproduksi sel-sel darah merah yang dibutuhkan oleh tubuh untuk membawa oksigen ke organ-organ vital. Sel CHO-DG44 merupakan salah satu sel mamalia yang dapat digunakan untuk produksi erythropoietin. Penelitian ini bertujuan menentukan pertumbuhan optimum sel CHO-DG44 selama 12 hari, dengan menggunakan parameter densitas dan viabilitas serta menentukan karakteristik DNA bakteri E. Coli DH5 alfa hasil isolasi menggunakan metode elektroforesis yang telah sesuai untuk transfeksi ke dalam sel CHO-DG44. Hasil penelitian menunjukkan Sel CHO-DG44 memiliki viabilitas rata-rata 69,82% untuk media 1 dan 75,99% untuk media 2 dengan densitas rata-rata berturut-turut yaitu 3.130.000 sel/mL dan 4.106.000 sel/mL. Sedangkan media kultur yang menghasilkan sel dengan viabilitas (kemampuan hidup) yang tinggi yaitu pada hari ke 4 untuk erlenmeyer 1 dan hari ke 6 untuk erlenmeyer 2. Dari hasil elektroforesis, DNA plasmid memiliki ukuran 5954 bp dengan konsentrasi DNA sebesar 117 ng/µl, yang sesuai dengan ukuran dan konsentrasi plasmid DNA agar dapat ditransfeksikan ke dalam sel CHO-DG44.
Downloads
References
Birch, J. R. dan Arathoon, R., 1990, Suspension Culture of Mammalian Cells. Bioprocess Technol 10: 251-270.
Brinks, V., Jiskoot, W. dan Schellekens, H., 2011, Immunogenicity of Therapeutic Proteins: The Use of Animal Models. Pharmaceutical research 28(10): 2379.
Dhaliwal, R. S., Kitchell, B. E., Ehrhart, E., Valli, V. E. dan Dervisis, N. G., 2013, Clinicopathologic Significance of Histologic Grade, Pgp, and P53 Expression in Canine Lymphoma. Journal of the American Animal Hospital Association 49(3): 175-184.
Eschbach, J. W., Downing, M. R., Egrie, J. C., Browne, J. K. dan Adamson, J. W., 1990, USA Multicenter Clinical Trial with Recombinant Human Erythropoietin (Amgen). Erythropoietin: From Molecular Structure to Clinical Application, Karger Publishers. 76: 160-165.
Ghatak, Souvik, Muthukumaran, R. B. dan Nachimuthu, S. K., 2013, A Simple Method of Genomic DNA Extraction from Human Samples for Pcr-Rflp Analysis. Biomolecular Techniques 24(4): 224-310.
Kitt, D., 2001, Extraction of DNA from Whole Blood and White Blood Cells.
Marks, L., 2015, The Lock and Key of Medicine: Monoclonal Antibodies and the Transformation of Healthcare. London, Yale University Press.
Miranda, E. A. C., Carvajal, J. F. M. dan Baena, O. J. R., 2015, Effect of the Fuels Glycine, Urea and Citric Acid on Synthesis of the Ceramic Pigment Zncr2o4 by Solution Combustion. Materials Research 18(5): 1038-1043.
Permenter, J., Ishwar, A., Rounsavall, A., Smith, M., Faske, J., Sailey, C. J. dan Alfaro, M. P., 2015, Quantitative Analysis of Genomic DNA Degradation in Whole Blood under Various Storage Conditions for Molecular Diagnostic Testing. Molecular and cellular probes 29(6): 449-453.
Reha, D., Kabelác, M., Ryjácek, F., Sponer, J., Sponer, J. E., Elstner, M., Suhai, S. dan Hobza, P., 2003, Intercalators. 1. Nature of Stacking Interactions between Intercalators (Ethidium, Daunomycin, Ellipticine, and 4′,6-Diaminide-2-Phenylindole) and DNA Base Pairs. Ab Initio Quantum Chemical, Density Functional Theory, and Empirical Potential Study. J. Am. Chem. Soc. 124: 3366-3376.
Santoso, A., W., P. H., N., R. A., S., E. P., Herawati, N. dan Kusumawati, A., 2013, Teknik Dasar Kultur Sel Mamalia. Cibinong, LIPI.
Van De Craen, B., Declerck, P. J. dan Gils, A., 2012, The Biochemistry, Physiology and Pathological Roles of Pai-1 and the Requirements for Pai-1 Inhibition in Vivo. Thrombosis research 130(4): 576-585.
