OPTIMASI AMPLIFIKASI DNA MENGGUNAKAN METODE PCR (Polymerase Chain Reaction) PADA IKAN KARANG ANGGOTA FAMILI Pseudochromidae (DOTTYBACK) UNTUK IDENTIFIKASI SPESIES SECARA MOLEKULAR

Abstract

Polymerase Chain Reaction (PCR) merupakan salah satu metode yang digunakan dalam identifikasi suatu organisme. Identifikasi secara molekular menggunakan metode berbasis PCR perlu dilakukan pada ikan karang Famili Pseudochromidae karena ikan ini mempunyai variasi morfologi warna yang sangat tinggi dan menyulitkan identifikasi morfologi. Metode amplifikasi DNA untuk seluruh spesies ikan anggota famili ini belum banyak dilakukan. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui kondisi optimal untuk amplifikasi DNA menggunakan metode PCR (Polymerase Chain Reaction) pada 25 spesies ikan karang anggota famili Pseudochromidae, yang sebelumnya telah diidentifikasi secara morfologi.
Amplifikasi dilakukan pada tiga loki DNA mitokondria, yaitu 16S rRNA, control region dan cytochrome oxidase I (COI). Hasil penelitian menunjukkan kondisi optimum amplifikasi tidak berhubungan dengan perbedaan spesies. Modifikasi amplifikasi dapat dilakukan dengan penambahan volume template DNA dan BSA 1X serta penggantian
temperatur annealing; sedangkan pergantian reagen tidak memberikan pengaruh yang signifikan. Penggunaan primer depan CRK untuk amplifikasi lokus control region juga memberikan hasil yang lebih baik.