PEMANFAATAN POLIPLEKS KHITOSAN-pDNA DALAM  TRANSFORMASI SEL Escherechia coli

I Putu Mahendra; I Nengah Wirajana; James Sibarani

I Putu Mahendra Jurusan Kimia Fakultas MIPA Universitas Udayana, Jimbaran, Badung, Bali, Indonesia
I Nengah Wirajana 1. Jurusan Kimia Fakultas MIPA Universitas Udayana, Jimbaran, Badung, Bali, Indonesia 2. Program Magister Kimia Terapan Program Pascasarjana Universitas Udayana, Denpasar, Bali Indonesia
James Sibarani 1. Jurusan Kimia Fakultas MIPA Universitas Udayana, Jimbaran, Badung, Bali, Indonesia 2. Program Magister Kimia Terapan Program Pascasarjana Universitas Udayana, Denpasar, Bali Indonesia

Abstract

ABSTRAK: Penelitian berkaitan dengan pemanfaatan khitosan sebagai pelindung DNA plasmid (pDNA) dalam proses transformasi sel pada sel inang Escherechia coli telah dilakukan yang bertujuan untuk memperoleh polipleks yang stabil dan untuk mengetahui dapat atau tidaknya diperoleh sel transforman dengan menggunakan polipleks. Penelitian ini diawali dengan melakukan isolasi khitosan dari limbah kulit udang yang memberikan derajat deasetilasi 83,30%. Selanjutnya dilakukan isolasi DNA plasmid dengan menggunakan kit dari Qiagen yang memberikan konsentrasi DNA plasmid 37,8 ?g/mL. Polipleks yang disintesis dari khitosan-DNA plasmid memberikan nilai potensial Zeta 9,63 mV. Penerapan polipleks dalam proses transformasi sel menunjukkan hasil positif, yang mana sel E. coli yang telah disisipkan material polipleks dan dibiakkan pada media ampisilin dapat tetap bertahan hidup, hal ini menunjukkan bahwa proses transformasi dengan polipleks khitosan-DNA plasmid telah berhasil dilakukan.

Kata kunci: Khitosan, DNA Plasmid, Polipleks, Transformasi Sel

ABSTRACT: The research about the application of chitosan as the carrier and protecting agent for the plasmid DNA (pDNA) in the cells transformation process on Escherechia coli had been carried out, the aim of this research was to obtain stabile and nanosize polyplex from chitosan and plasmid DNA and to get the information if the cells transformation process could be done using the polyplex. The chitosan was isolated from shrimp's shelled deacetylation degree of 83,3%. The concentration of plasmid DNA was 36,75 ug/mL isolated using a Qiagen kit. The chitosan-plasmid DNA polyplex had the Zeta potential of 9,63 mV. Further, the application of the polyplex on the transformation process of E. coli cells showed a positive result where E. coli cells that had been inserted with the polyplex were bred in amphicillin media still survived. This fact showed that the cells transformation process using the polyplex was successfully performed.

Keywords: Chitosan, Plasmid DNA, Polyplex, Cell Transformation

Downloads

Download data is not yet available.